Jeden svet jeden boj
─ medzinárodná spolupráca s cieľom vybudovať globálnu komunitu spoločného osudu, ktorý reaguje na pandémiu Covid-19
Román Coronavirus zametanie po celom svete viedol k prebiehajúcej globálnej pandémickej kríze Covid-19. Román Coronavírus nemá hranice, z tejto bitky proti Covid-19 nebude ušetrená žiadna krajina. V reakcii na túto celosvetovú pandémiu Covid-19 Liming Bio-Products Corp prispieva na podporu pohody našich globálnych komunít.
Náš svet v súčasnosti čelí bezprecedentnému vplyvu novej pandémie Coronavírusu 2019 (Covid-19). Doteraz nie je k dispozícii žiadny účinný liek na liečbu tohto ochorenia. Na detekciu Covid-19 bolo však vyvinutých veľa diagnostických testov. Tieto testy sú založené na molekulárnych alebo sérologických metódach na detekciu nových biomarkerov nukleovej kyseliny alebo protilátok špecifických pre koronavírus. Keďže Covid-19 dosiahol panddemický stav, včasná diagnostika novej koronavírusovej infekcie je rozhodujúca pri hodnotení šírenia vírusu a jeho obsahujúcej, ale dokonalý test na univerzálne použitie ešte neexistuje. Musíme vedieť, aké testy by sa mohli potenciálne použiť na skríning, diagnostiku a monitorovanie infekcie Covid-19 a aké sú ich obmedzenia. Je veľmi dôležité, ako lepšie využiť tieto vedecké nástroje a pomôcť identifikovať a kontrolovať vznik tejto rýchlo sa šírili a vážne choroby.
Účelom detekcie nového koronavírusu je určiť, či jednotlivec, ktorý má infekciu Covid-19, alebo asymptotické nosiča, ktorý môže vírus ticho šíriť, aby poskytol základné informácie na usmernenie rozhodovania o klinickej liečbe. Predchádzajúce štúdie ukázali, že 70% klinických rozhodnutí závisí od výsledkov testovania. Ak sa použijú rôzne metódy detekcie, požiadavky súprav detekčných činidiel sa tiež líšia.
Obrázok 1
Obrázok1:Schéma zobrazujúci kľúčové štádiá všeobecných hladín biomarkerov počas typického časového priebehu infekcie Covid-19. Os x označuje počet dní infekcie a os y označuje vírusovú záťaž, koncentráciu antigénov a koncentráciu protilátok v rôznych obdobiach. Protilátka sa vzťahuje na protilátky IgM a IgG. Detekcia RT-PCR aj antigén sa používajú na detekciu prítomnosti alebo neprítomnosti nového koronavírusu, čo je priamym dôkazom včasnej detekcie pacientov. V priebehu týždňa vírusovej infekcie sa uprednostňuje detekcia PCR alebo detekcia antigénu. Po novej infekcii koronavírusom počas asi 7 dní sa v krvi pacienta postupne zvyšovala protilátka IgM proti novému koronavírusu, ale trvanie existencie je krátke a jej koncentrácia sa rýchlo znižuje. Naopak, IgG protilátka proti vírusu sa objaví neskôr, zvyčajne asi 14 dní po infekcii vírusom. Koncentrácia IgG sa postupne zvyšuje a pretrváva dlhé obdobie v krvi. Ak sa teda IgM deteguje v krvi pacienta, znamená to, že vírus nedávno infikoval, čo je marker skorej infekcie. Ak je IgG protilátka detegovaná v krvi pacienta, znamená to, že vírusová infekcia bola už nejaký čas. Nazýva sa tiež oneskorená infekcia alebo predchádzajúca infekcia. Často sa pozoruje u pacientov, ktorí sú vo fáze zotavenia.
Biomarkery nového koronavírusu
Nový koronavírus je vírus RNA, ktorý sa skladá z proteínov a nukleových kyselín. Vírus napadne hostiteľské (ľudské) telo, vstupuje do buniek prostredníctvom väzbového miesta zodpovedajúceho receptora ACE2 a replikuje sa v hostiteľských bunkách, čo spôsobuje, že ľudský imunitný systém reaguje na cudzích útočníkov a produkuje špecifické protilátky. Preto môžu byť nukleové kyseliny a antigény a špecifické protilátky proti novému koronavírusu teoreticky použité ako špecifické biomarkery na detekciu nového koronavírusu. Na detekciu nukleových kyselín je najbežnejšie používaná technológia RT-PCR, zatiaľ čo sérologické metódy sa bežne používajú na detekciu nových protilátok špecifických pre koronavírus. V súčasnosti existuje množstvo testovacích metód, ktoré si môžeme vybrať na testovanie infekcie Covid-19 [1].
Základné princípy hlavných testovacích metód pre nový koronavírus
Doteraz je k dispozícii veľa diagnostických testov pre Covid_19, pričom viac testovacích súprav prijíma schválenie na základe povolenia na núdzové použitie každý deň. Aj keď nový vývojový vývoj vychádzajúci s toľkými rôznymi názvami a formátmi, všetky súčasné testy Covid_19 sa v podstate spoliehajú na dve hlavné technológie: detekcia nukleových kyselín pre vírusovú RNA a sérologické imunotesty, ktoré detegujú vírusovo špecifické protilátky (IgM a IgG).
01. Detekcia nukleových kyselín
Reverzná reťazová reakcia reverznej transkripcie-polymerázy (RT-PCR), izotermálna amplifikácia sprostredkovaná slučkou (LAMP) a sekvenovanie novej generácie (NGS) sú bežné metódy nukleovej kyseliny na detekciu novej koronavírusovej RNA. RT-PCR je prvý typ testu pre Covid-19, ktorý odporúča Svetová zdravotnícka organizácia (WHO) a americké centrum pre kontrolu a prevenciu chorôb (CDC).
02. DetekciaSerologická protilátka
Protilátka je ochranný proteín produkovaný v ľudskom tele v reakcii na infekciu vírusu. IgM je skorý typ protilátky, zatiaľ čo IgG je neskoršia protilátka. Vzorka séra alebo plazmy sa zvyčajne skúma na prítomnosť špecifických typov IgM a IgG protilátky na hodnotenie akútnych a zotavovacích fáz infekcie Covid-19. Tieto metódy detekcie založené na protilátkach zahŕňajú test imunochromatografie koloidného zlata, latex alebo fluorescenčná mikosférická imunochromatografia, enzýmovo spojený imunosorbentný test (ELISA) a test chemiluminiscencie.
03. Detekcia antigénu antigénu
Antigén je štruktúra vírusu rozpoznávaného ľudským telom, ktorá spúšťa imunitný obranný systém na výrobu protilátok na vyčistenie vírusu z krvi a tkanív. Vírusový antigén prítomný na vírusu môže byť zacielený a detegovaný pomocou imunotest. Rovnako ako vírusová RNA, aj vírusové antigény sú prítomné aj v respiračnom trakte infikovaných jedincov a môžu sa použiť na diagnostiku akútnej fázy infekcie Covid-19. Preto sa často odporúča zhromažďovať vzorky horných dýchacích ciest, ako sú sliny, nosohlónne a orofaryngeálne tampóny, hlboký kašeľ spúta, bronchoalveolárna výplachová tekutina (BALF) na počiatočné testovanie antigénov.
Výber metód testovania pre nový koronavírus
Výber metódy testovania zahŕňa mnoho faktorov vrátane klinického nastavenia, kontroly kvality testovania, času obratu, nákladov na testovanie, metód zberu vzorkovania, technických požiadaviek laboratórnych personálu, požiadaviek na zariadenie a vybavenie. Detekcia nukleových kyselín alebo vírusových antigénov je poskytnúť priamy dôkaz prítomnosti vírusov a potvrdenie diagnózy novej koronavírusovej infekcie. Aj keď existuje veľa metód na detekciu antigénu, ich detekčná citlivosť nového koronavírusu je teoreticky nižšia ako amplifikácia RT-PCR. Testovanie protilátok je detekcia antivírusových protilátok produkovaných v ľudskom tele, ktoré zaostáva v čase a často sa nemôže použiť na včasnú detekciu počas akútnej fázy vírusovej infekcie. Klinické nastavenie pre detekčné aplikácie sa môže líšiť a miesta odberu vzoriek sa môžu tiež líšiť. Na detekciu vírusových nukleových kyselín a antigénov musí byť vzorka zozbieraná v respiračnom trakte, kde je prítomný vírus, ako sú napríklad nosohltany, výplaty orofaryngeálnych tampónov, sputum alebo bronchoalveolárna výplata (BALF). Na detekciu založenú na protilátkach je potrebné odobrať a skúmať prítomnosť špecifickej antivírusovej protilátky (IgM/IgG). Výsledky testu protilátok a nukleových kyselín sa však môžu navzájom dopĺňať. Napríklad, keď výsledkom testovania je nukleová kyselina negatívna, IgM-negatívna, ale IgG pozitívna, tieto výsledky naznačujú, že pacient v súčasnosti nemá vírus, ale bol získaný z novej infekcie koronavírusu. [2]
Výhody a nevýhody nových testov koronavírusu
V protokole diagnostiky a liečby pre novú koronavírusovú pneumóniu (pokus verzia7) (vydané Národnou komisiou pre zdravie a štátnou správou tradičnej čínskej medicíny 3. marca 2020) sa testovanie nukleových kyselín používa ako zlatá štandardná metóda na diagnostiku nových nových Infekcia koronavírusu, zatiaľ čo testovanie protilátok sa tiež považuje za jednu z metód potvrdenia diagnózy.
Patogénne a sérologické nálezy
(1) Patogénne nálezy: Nová kyselina nukleová kyselina koronavírus sa môže detegovať v nosohltanových šatách, spútu, dolných sekrétoch dýchacích ciest, krvi, výkalov a iných vzoriek pomocou metód RT-PCrand/alebo NGS. Je presnejšie, ak sa vzorky získajú z dolného dýchacích ciest (extrakcia spúta alebo vzduchového traktu). Vzorky by mali byť predložené na testovanie čo najskôr po zberu.
(2) sérologické nálezy: IgM špecifický pre vírus NCP sa stáva detegovateľnými okolo 3-5 dní po začiatku; IgG dosahuje titráciu najmenej 4-násobného zvýšenia počas rekonvalescencie v porovnaní s akútnou fázou.
Výber metód testovania však závisí od geografických miest, lekárskych predpisov a klinických prostredí. In the USA, the NIH issued Coronavirus Disease 2019 (COVID-19) Treatment Guidelines (Site Updated: April 21,2020 ) and FDA issued Policy for Diagnostic Tests for Coronavirus Disease-2019 during the Public Health Emergency (issued on March 16,2020 ), v ktorom sa sérologické testovanie protilátok IgM/IgG vybralo iba ako skríningový test.
Metóda detekcie nukleových kyselín
RT_PCR je vysoko citlivý test nukleových kyselín určený na zistenie, či je v respiračnom alebo inom vzorke prítomná nová koronavírusová RNA. Pozitívny výsledok testu PCR znamená prítomnosť novej koronavírusovej RNA vo vzorke na potvrdenie infekcie Covid-19. Negatívny výsledok testu PCR neznamená neprítomnosť vírusovej infekcie, pretože by mohla byť ovplyvnená slabou kvalitou vzorky alebo časovým bodom ochorenia v získanej fáze atď. Aj keď RT-PCR je vysoko citlivý test, má niekoľko nevýhod. Testy RT-PCR môžu byť náročné na prácu a časovo náročné, zásadne závislé od vysokej kvality vzorky. Môže to byť výzva, pretože množstvo vírusovej RNA sa medzi rôznymi pacientmi nielen veľmi líši, ale tiež sa môže meniť v rámci toho istého pacienta v závislosti od časových bodov, keď sa odobrala vzorka, ako aj od fáz infekcie alebo nástupu klinických symptómov. Detekcia nového koronavírusu vyžaduje vysokokvalitné vzorky, ktoré obsahujú dostatočné množstvo neporušenej vírusovej RNA.
Test RT-PCR môže poskytnúť nesprávny negatívny výsledok (falošne negatívny) u niektorých pacientov, ktorí majú infekciu Covid-19. Ako vieme, hlavné infekčné miesta nového koronavírusu sa nachádzajú v pľúcach a dolnom respiračnom trakte, ako sú alveoli a bronchi. Preto sa vzorka spúta z hlbokého kašľa alebo bronchoalveolárnej výplachovej tekutiny (BALF) považuje za najvyššiu citlivosť na detekciu vírusu. V klinickej praxi sa však vzorky často odoberajú z horných dýchacích ciest pomocou nosa nosohltanu alebo orofaryngeálnych tampónov. Zhromažďovanie týchto vzoriek je nielen nepohodlné pre pacientov, ale vyžaduje si tiež špeciálne vyškolených zamestnancov. Aby sa odber vzoriek stal menej invazívnym alebo jednoduchším, v niektorých prípadoch môžu pacientom podať ústny tampón a umožniť im odobrať vzorku z bukálnej sliznice alebo jazyka. Bez dostatočnej vírusovej RNA môže RT-qPCR vrátiť falošný negatívny výsledok testu. V provincii Hubei, Čína, bola citlivosť RT-PCR pri počiatočnej detekcii hlásená iba asi 30%-50%, v priemere 40%. Vysoká miera falošne negatívnych bola s najväčšou pravdepodobnosťou spôsobená nedostatočným odberom vzoriek.
Okrem toho test RT-PCR vyžaduje, aby vysoko trénovaný personál vykonal komplexné kroky extrakcie RNA a postup amplifikácie PCR. Vyžaduje si tiež vyššiu úroveň ochrany biologickej bezpečnosti, špeciálne laboratórne zariadenie a nástroj PCR v reálnom čase. V Číne je potrebné vykonať test RT-PCR na detekciu Covid-19 v laboratóriách úrovne 2 (BSL-2), pričom ochrana personálu pomocou biologickej bezpečnosti úrovne 3 (BSL-3). Podľa týchto požiadaviek bolo od začiatku januára do začiatku februára 2020 kapacita laboratória CDC v Číne Wuhan schopná zistiť iba niekoľko stoviek prípadov za deň. Normálne by to nebol problém pri testovaní iných infekčných chorôb. Pri riešení globálnej pandémie, ako je napríklad Covid-19 s potenciálne miliónmi ľudí, ktorí sa majú testovať, sa však RT-PCR stáva kritickou otázkou kvôli svojim požiadavkám na špeciálne laboratórne zariadenia alebo technické vybavenie. Tieto nevýhody môžu obmedziť RT-PCR na použitie ako efektívny nástroj na skríning a tiež môžu viesť k oneskoreniam v správach o výsledkoch testovania.
Metóda detekcie sérologických protilátok
S postupom priebehu choroby, najmä v stredných a neskorých štádiách, je miera detekcie protilátky veľmi vysoká. Štúdia v nemocnici Wuhan Central South Hospital ukázala, že miera detekcie protilátok by mohla v treťom týždni infekcie Covid-19 dosiahnuť viac ako 90%. Protilátka je tiež produktom ľudskej imunitnej reakcie proti novému koronavírusu. Test protilátky ponúka oproti RT-PCR niekoľko výhod. Po prvé, sérologická protilátka testuje jednoduché a rýchle. Bočné testy protilátok protilátok sa môžu použiť na miesto starostlivosti na dosiahnutie výsledku za 15 minút. Po druhé, cieľom detegovaným sérologickým testom je protilátka, o ktorej je známe, že je oveľa stabilnejšia ako vírusová RNA. Počas zberu, prepravy, skladovania a testovania sú vzorky pre testy protilátok vo všeobecnosti stabilnejšie ako vzorky pre RT-PCR. Po tretie, pretože protilátka je rovnomerne rozložená v krvnom obehu, v porovnaní s testom nukleových kyselín je menšia variácia vzorkovania. Objem vzorky potrebný na test protilátky je relatívne malý. Napríklad 10 mikroliter krvi na prsty je dostatočná na použitie pri teste laterálneho prietoku protilátky.
Vo všeobecnosti je test protilátky vybraný ako doplnkový nástroj na detekciu nukleových kyselín na zlepšenie miery detekcie nového koronavírusu počas kurzov choroby. Ak sa test protilátky použije spolu s testom nukleových kyselín, môže zvýšiť presnosť testu na diagnostiku CovID19 znížením potenciálnych falošne pozitívnych a falošne negatívnych výsledkov. Aktuálna príručka operácie neodporúča používať dva typy testu osobitne ako nezávislý detekčný formát, ale mal by sa používať ako kombinovaný formát. [2]
Obrázok2:Správna interpretácia výsledkov testov nukleovej kyseliny a protilátok na detekciu novej infekcie koronavírusu
Obrázok 3:LIMING BIO-Products Co., Ltd.-Nový koronavírus IgM/IgG protilátka Dual Rapid Test Kit (StrongStep®SARS-COV-2 IgM/IgG protilátka Rýchle test, latexová imunochromatografia)
Obrázok 4:Liming Bio-Products Co., Ltd.-StrongStep®Nový koronavírus (SARS-COV-2) Multiplexná súprava PCR v reálnom čase (detekcia pre tri gény, metóda fluorescenčnej sondy).
Poznámka:Táto vysoko citlivá súprava PCR pripravená na použitie je k dispozícii v lyofilizovanom formáte (proces zmrazenia sušenia) pre dlhodobé úložisko. Súprava je možné prepravovať a skladovať pri izbovej teplote a je stabilná na jeden rok. Každá trubica premixu obsahuje všetky reagenty potrebné na amplifikáciu PCR, vrátane reverznej transcriptázy, TAQ polymerázy, primerov, sond a substrátov DNTP. Zobrazovače môžu jednoducho rekonštruovať zmes pridaním vody PCR spolu so templátom a potom načítať na nástroj PCR na spustenie zosilnenia.
V reakcii na nové vypuknutie koronavírusu, Liming Bio-Products Co., Ltd., rýchlo pracoval na vývoji dvoch diagnostických súprav, aby umožnil klinickým a verejným zdravotníckym laboratóriám rýchlo diagnostikovať infekciu Covid-19. Tieto súpravy sú veľmi vhodné na použitie pre rozsiahle skríning v krajinách a regiónoch, v ktorých sa nové vypuknutie koronavírusu rýchlo šíri a na zabezpečenie diagnostiky a potvrdenia infekcie Covid-19. Tieto súpravy sa používajú iba v pred notifikovaným povolením núdzového použitia (PEUA). Testovanie je obmedzené na laboratóriá osvedčené podľa nariadení národných alebo miestnych orgánov.
Metóda detekcie antigénu
1. Detekcia vírusového antigénu je klasifikovaná v rovnakej kategórii priamej detekcie ako detekcia nukleových kyselín. Tieto metódy priamej detekcie hľadajú dôkazy o vírusových patogénoch vo vzorke a môžu sa použiť na diagnostiku potvrdenia. Vývoj súprav na detekciu antigénu však vyžaduje vysokú kvalitu monoklonálnych protilátok so silnou afinitou a vysokou citlivosťou schopnou rozpoznať a zachytiť patogénne vírusy. Výber a optimalizácia monoklonálnej protilátky vhodnej na použitie pri príprave súpravy na detekciu antigénu zvyčajne trvá viac ako šesť mesiacov.
2. V súčasnosti sú činidlá na priamu detekciu nového koronavírusu stále v oblasti výskumu a vývoja. Preto nebola klinicky overená a komerčne dostupná súprava na detekciu antigénu. Aj keď sa predtým uvádza, že diagnostická firma v Shenzhen vyvinula súpravu na detekciu antigénu a klinicky testovanú v Španielsku, spoľahlivosť a presnosť testu nebolo možné potvrdiť z dôvodu prítomnosti problémov s kvalitou činidla. K dnešnému dňu spoločnosť NMPA (bývalá Čína FDA) ešte neschválila žiadnu súpravu na detekciu antigénu na klinické použitie. Záverom bolo vyvinuté rôzne detekčné metódy. Každá metóda má svoje výhody a obmedzenia. Výsledky rôznych metód sa môžu použiť na overenie a doplnok.
3. Výroba kvalitnej testovacej súpravy Covid-19 Covid-19 dôrazne závisí od optimalizácie počas výskumu a vývoja. Liming Bio-Product Co., Ltd. Testovacie súpravy sú potrebné na splnenie prísnych štandardov výroby a kontroly kvality, aby sa zabezpečilo, že poskytujú najvyššiu úroveň výkonnosti a konzistentnosti. Vedci spoločnosti Liming Bio-Product Co., Ltd. majú viac ako dvadsaťročné skúsenosti s navrhovaním, testovaním a optimalizáciou diagnostických súprav in vitro, aby sa zabezpečila najvyššia úroveň výkonnosti pri analytickej kvantifikácii.
Počas pandémie Covid-19 čelila čínskej vláde nárast obrovského dopytu po materiáloch o prevencii epidémie v medzinárodných hotspotoch. 5. apríla na tlačovej konferencii spoločného mechanizmu prevencie a kontroly prevencie štátnej rady „Posilnenie riadenia kvality zdravotníckych materiálov a regulácia poradia trhu“, Jiang Fan, inšpektor prvej úrovne ministerstva zahraničného obchodu ministerstva Spoločnosť Commerce uviedla: „Ďalej sa zameriame na naše úsilie na dva aspekty, najprv urýchliť podporu viacerých zdravotníckych potrieb potrebných medzinárodným spoločenstvom a tiež na zlepšenie kontroly kvality, regulácie a riadenia výrobkov. Prispeli sme Číny k spoločnej reagovaní na globálnu epidémiu a budovaní komunity so spoločnou budúcnosťou pre ľudstvo.
Obrázok 5:LIMING BIO-Products Co., román Ltd. Coronavirus Reagent získal osvedčenie o registrácii EÚ CE CE
Čestné osvedčenie
Domácnosť
Obrázok 6. Liming Bio-Products Co., Ltd. podporoval horskú nemocnicu Wuhan Vulcan (Houshenshan), aby bojoval proti epidémii Covid-19 a získal čestný certifikát Wuhan Red Cross. Wuhan Vulcan Mountain Hospital je najslávnejšou nemocnicou v Číne, ktorá sa špecializuje na liečbu ťažkých cudzincov - 19 pacientov.
Keďže nové vypuknutie Coronavírusu pokračuje v rozširovaní po celom svete, Nanjing Liming Liming Bio-Products Co., Ltd. sa zvyšuje na podporu a pomoc komunitám na celom svete s našimi inovatívnymi technológiami v boji proti tejto bezprecedentnej globálnej hrozbe. Rýchle testovanie infekcie Covid-19 je kritickou súčasťou riešenia tejto hrozby. Naďalej prispievame významným spôsobom poskytovaním vysoko kvalitných diagnostických platforiem do rúk pracovníkov v oblasti frontline zdravotníctva, aby ľudia mohli dostávať kritické výsledky testovania, ktoré potrebujú. Spoločnosť Liming Bio-Products Co., Ltd., úsilie v boji proti pandémii Covid-19 Pandemic, má prispievať našim technológiám, skúsenostiam a odborným znalostiam do medzinárodných komunít na výstavbu globálnej komunity osudu.
Dlho stlačte ~ skenujte a sledujte nás
E -mail: sales@limingbio.com
Webová stránka: https://limingbio.com
Čas príspevku: máj-01-2020
