Jeden svet, jeden boj
─Medzinárodná spolupráca na vybudovaní globálnej komunity spoločného osudu reagujúcej na výzvu pandémie COVID-19
Nový koronavírus, ktorý sa šíri po celom svete, viedol k prebiehajúcej globálnej pandemickej kríze COVID-19.Nový koronavírus nemá hranice, žiadna krajina nebude ušetrená od tohto boja proti COVID-19.V reakcii na túto celosvetovú pandémiu COVID-19 spoločnosť Liming Bio-Products Corp prispieva na podporu blaha našich globálnych komunít.
Náš svet v súčasnosti čelí bezprecedentnému vplyvu pandémie nového koronavírusového ochorenia 2019 (COVID-19).Doteraz neexistuje účinný liek na liečbu tohto ochorenia.Na detekciu COVID-19 však bolo vyvinutých mnoho diagnostických testov.Tieto testy sú založené na molekulárnych alebo sérologických metódach na detekciu nových biomarkerov nukleovej kyseliny špecifickej pre koronavírus alebo protilátok.Keďže COVID-19 dosiahol pandemický stav, včasná diagnostika novej koronavírusovej infekcie je rozhodujúca pri hodnotení šírenia vírusu a jeho potlačenia, no dokonalý test na univerzálne použitie zatiaľ neexistuje.Musíme vedieť, aké testy by sa mohli potenciálne použiť na skríning, diagnostiku a monitorovanie infekcie COVID-19 a aké sú ich obmedzenia.Je veľmi dôležité, ako lepšie využiť tieto vedecké nástroje a pomôcť identifikovať a kontrolovať výskyt tohto rýchlo sa šíriaceho a závažného ochorenia.
Účelom detekcie nového koronavírusu je určiť, či jedinec, ktorý má infekciu COVID-19, alebo asymptotický nosič, ktorý môže vírus šíriť v tichosti, poskytnúť základné informácie pre rozhodovanie o klinickej liečbe.Predchádzajúce štúdie ukázali, že 70 % klinických rozhodnutí závisí od výsledkov testovania.Pri použití rôznych metód detekcie sa líšia aj požiadavky na súpravy detekčných činidiel.
postava 1
Postava 1:Diagram zobrazujúci kľúčové štádiá hladín všeobecných biomarkerov počas typického časového priebehu infekcie COVID-19.Os X označuje počet dní infekcie a os Y označuje vírusovú záťaž, koncentráciu antigénov a koncentráciu protilátok v rôznych obdobiach.Protilátka označuje IgM a IgG protilátky.RT-PCR aj detekcia antigénu sa používajú na detekciu prítomnosti alebo neprítomnosti nového koronavírusu, čo je priamy dôkaz pre včasnú detekciu pacienta.Do týždňa od vírusovej infekcie sa uprednostňuje detekcia PCR alebo detekcia antigénu.Po infekcii novým koronavírusom približne 7 dní sa v krvi pacienta postupne zvyšuje protilátka IgM proti novému koronavírusu, ale dĺžka existencie je krátka a jej koncentrácia rýchlo klesá.Naproti tomu IgG protilátka proti vírusu sa objaví neskôr, zvyčajne asi 14 dní po infekcii vírusom.Koncentrácia IgG sa postupne zvyšuje a v krvi pretrváva dlhú dobu.Ak sa teda IgM deteguje v krvi pacienta, znamená to, že vírus sa nedávno infikoval, čo je marker včasnej infekcie.Keď sa v krvi pacienta zistí protilátka IgG, znamená to, že vírusová infekcia už nejaký čas trvá.Tiež sa nazýva neskorá infekcia alebo predchádzajúca infekcia.Často sa vyskytuje u pacientov, ktorí sú vo fáze zotavovania.
Biomarkery nového koronavírusu
Nový koronavírus je RNA vírus, ktorý sa skladá z proteínov a nukleových kyselín.Vírus napáda hostiteľské (ľudské) telo, vstupuje do buniek cez väzobné miesto zodpovedajúce receptoru ACE2 a replikuje sa v hostiteľských bunkách, čo spôsobuje, že ľudský imunitný systém reaguje na cudzích útočníkov a produkuje špecifické protilátky.Nukleové kyseliny a antigény ampulky a špecifické protilátky proti novému koronavírusu sa preto môžu teoreticky použiť ako špecifické biomarkery na detekciu nového koronavírusu.Na detekciu nukleových kyselín sa najčastejšie používa technológia RT-PCR, zatiaľ čo sérologické metódy sa bežne používajú na detekciu nových protilátok špecifických pre koronavírus.V súčasnosti je k dispozícii množstvo testovacích metód, ktoré si môžeme vybrať na testovanie infekcie COVID-19 [1].
Základné princípy hlavných testovacích metód na nový koronavírus
Zatiaľ je k dispozícii mnoho diagnostických testov na COVID_19, pričom každý deň dostáva schválenie na základe autorizácie na núdzové použitie viac testovacích súprav.Hoci vývoj nových testov prichádza s toľkými rôznymi názvami a formátmi, všetky súčasné testy COVID_19 sa v podstate spoliehajú na dve hlavné technológie: detekciu nukleových kyselín pre vírusovú RNA a sérologické imunotesty, ktoré detegujú vírusovo špecifické protilátky (IgM a IgG).
01. Detekcia nukleových kyselín
Reverzná transkripcia-polymerázová reťazová reakcia (RT-PCR), izotermická amplifikácia sprostredkovaná slučkou (LAMP) a sekvenovanie novej generácie (NGS) sú bežné metódy nukleových kyselín na detekciu novej koronavírusovej RNA.RT-PCR je prvý typ testu na COVID-19 odporúčaný Svetovou zdravotníckou organizáciou (WHO) aj americkým Centrom pre kontrolu a prevenciu chorôb (CDC).
02.Sérologická detekcia protilátok
Protilátka je ochranný proteín produkovaný v ľudskom tele ako odpoveď na vírusovú infekciu.IgM je skorý typ protilátky, zatiaľ čo IgG je neskorší typ protilátky.Vzorka séra alebo plazmy sa zvyčajne vyšetruje na prítomnosť špecifických typov IgM a IgG protilátky na posúdenie akútnej a rekonvalescentnej fázy infekcie COVID-19.Tieto metódy detekcie založené na protilátkach zahŕňajú imunochromatografický test na koloidnom zlate, latexovú alebo fluorescenčnú mikroguľôčkovú imunochromatografiu, enzýmovo viazaný imunosorbentový test (ELISA) a chemiluminiscenčný test.
03.Detekcia vírusového antigénu
Antigén je štruktúra vírusu rozpoznaná ľudským telom, ktorá spúšťa imunitný obranný systém na produkciu protilátok na odstránenie vírusu z krvi a tkanív.Vírusový antigén prítomný na víruse môže byť cielený a detegovaný pomocou imunotestu.Podobne ako vírusová RNA, aj vírusové antigény sú prítomné v dýchacom trakte infikovaných jedincov a možno ich použiť na diagnostiku akútnej fázy infekcie COVID-19.Preto sa často odporúča odobrať vzorky horných dýchacích ciest, ako sú sliny, nazofaryngeálne a orofaryngeálne výtery, spútum z hlbokého kašľa, tekutina z bronchoalveolárnej laváže (BALF) na počiatočné vyšetrenie antigénu.
Výber testovacích metód na nový koronavírus
Výber testovacej metódy zahŕňa mnoho faktorov, vrátane klinického prostredia, kontroly kvality testovania, doby obrátky, nákladov na testovanie, metód odberu vzoriek, technických požiadaviek na laboratórny personál, požiadaviek na zariadenie a vybavenie.Detekcia nukleových kyselín alebo vírusových antigénov má poskytnúť priamy dôkaz o prítomnosti vírusov a potvrdiť diagnózu novej koronavírusovej infekcie.Hoci existuje veľa metód na detekciu antigénu, ich detekčná citlivosť nového koronavírusu je teoreticky nižšia ako citlivosť RT-PCR amplifikácie.Testovanie protilátok je detekcia antivírusových protilátok produkovaných v ľudskom organizme, ktorá zaostáva v čase a často sa nedá použiť na včasnú detekciu počas akútnej fázy vírusovej infekcie.Klinické nastavenie pre aplikácie detekcie sa môže líšiť a môžu sa líšiť aj miesta odberu vzoriek.Na detekciu vírusových nukleových kyselín a antigénov je potrebné odobrať vzorku z dýchacieho traktu, kde sa vírus nachádza, ako sú výtery z nosohltanu, orofaryngeálne výtery, spútum alebo tekutina z bronchoalveolárnej laváže (BALF).Na detekciu založenú na protilátkach je potrebné odobrať vzorku krvi a vyšetriť ju na prítomnosť špecifickej antivírusovej protilátky (IgM/IgG).Výsledky testov protilátok a nukleových kyselín sa však môžu navzájom dopĺňať.Napríklad, keď je výsledkom testovania negatívna nukleová kyselina, negatívna IgM, ale pozitívna IgG, tieto výsledky naznačujú, že pacient v súčasnosti nie je nositeľom vírusu, ale už sa zotavil z infekcie novým koronavírusom.[2]
Výhody a nevýhody nových testov na koronavírus
V protokole diagnostiky a liečby pre nový koronavírusový zápal pľúc (skúšobná verzia 7) (vydaný Národnou zdravotníckou komisiou a Štátnou správou tradičnej čínskej medicíny 3. marca 2020) sa testovanie nukleových kyselín používa ako metóda zlatého štandardu na diagnostiku nového infekcia koronavírusom, pričom testovanie protilátok sa tiež považuje za jednu z metód potvrdenia diagnózy.
Patogénne a sérologické nálezy
(1) Patogénne nálezy: Nová nukleová kyselina koronavírusu môže byť detekovaná vo výteroch z nosohltanu, spúte, sekrétoch z dolných dýchacích ciest, krvi, výkaloch a iných vzorkách pomocou metód RT-PCR a/alebo NGS.Je presnejšie, ak sú vzorky získané z dolných dýchacích ciest (extrakcia spúta alebo vzduchu).Vzorky by mali byť predložené na testovanie čo najskôr po odbere.
(2) Sérologické nálezy: IgM špecifický pre vírus NCP sa stáva detekovateľným približne 3-5 dní po nástupe;IgG dosahuje titráciu aspoň 4-násobného zvýšenia počas rekonvalescencie v porovnaní s akútnou fázou.
Výber testovacích metód však závisí od geografickej polohy, lekárskych predpisov a klinického prostredia.V USA vydala NIH Usmernenia pre liečbu koronavírusovej choroby 2019 (COVID-19) (Aktualizovaná stránka: 21. apríla 2020) a FDA vydala Politiku pre diagnostické testy na koronavírusovú chorobu-2019 počas núdzového stavu v oblasti verejného zdravia (vydané 16. marca 2020 ), pri ktorej sa sérologické vyšetrenie protilátok IgM/IgG vybralo len ako skríningový test.
Metóda detekcie nukleových kyselín
RT_PCR je vysoko citlivý test nukleových kyselín navrhnutý na zistenie, či je alebo nie je prítomná nová RNA koronavírusu v respiračnej alebo inej vzorke.Pozitívny výsledok testu PCR znamená prítomnosť novej RNA koronavírusu vo vzorke na potvrdenie infekcie COVID-19.Negatívny výsledok testu PCR neznamená neprítomnosť vírusovej infekcie, pretože to môže byť ovplyvnené zlou kvalitou vzorky alebo časovým bodom ochorenia v zotavenej fáze atď.Hoci je RT-PCR vysoko citlivý test, má niekoľko nevýhod.Testy RT-PCR môžu byť náročné na prácu a čas, v rozhodujúcej miere závisia od vysokej kvality vzorky.To môže byť problém, pretože množstvo vírusovej RNA sa nielen medzi rôznymi pacientmi veľmi líši, ale môže sa líšiť aj v rámci toho istého pacienta v závislosti od časových bodov, kedy sa vzorka odoberá, ako aj od infekčných fáz alebo od nástupu klinických symptómov.Detekcia nového koronavírusu si vyžaduje vysokokvalitné vzorky, ktoré obsahujú dostatočné množstvo intaktnej vírusovej RNA.
Test RT-PCR môže u niektorých pacientov s infekciou COVID-19 poskytnúť nesprávny negatívny výsledok (falošne negatívny).Ako vieme, hlavné miesta infekcie nového koronavírusu sa nachádzajú v pľúcach a dolných dýchacích cestách, ako sú alveoly a priedušky.Preto sa vzorka spúta z hlbokého kašľa alebo tekutina z bronchoalveolárnej laváže (BALF) považujú za vzorky s najvyššou citlivosťou na detekciu vírusu.V klinickej praxi sa však vzorky často odoberajú z horných dýchacích ciest pomocou nazofaryngeálnych alebo orofaryngeálnych výterov.Odber týchto vzoriek je nielen nepríjemný pre pacientov, ale vyžaduje si aj špeciálne vyškolený personál.Aby bol odber vzoriek menej invazívny alebo jednoduchší, v niektorých prípadoch možno pacientom podať ústny tampón a umožniť im, aby si sami odobrali vzorku z bukálnej sliznice alebo z jazyka.Bez dostatočného množstva vírusovej RNA môže RT-qPCR vrátiť falošne negatívny výsledok testu.V provincii Chu-pej v Číne bola citlivosť RT-PCR pri počiatočnej detekcii hlásená len okolo 30 % - 50 %, s priemerom 40 %.Vysoká miera falošne negatívnych výsledkov bola s najväčšou pravdepodobnosťou spôsobená nedostatočným odberom vzoriek.
Okrem toho test RT-PCR vyžaduje vysoko vyškolený personál na vykonávanie zložitých krokov extrakcie RNA a postupu amplifikácie PCR.Vyžaduje si to tiež vyššiu úroveň ochrany biologickej bezpečnosti, špeciálne laboratórne vybavenie a prístroj PCR v reálnom čase.V Číne je potrebné vykonať test RT-PCR na zistenie COVID-19 v laboratóriách úrovne biologickej bezpečnosti 2 (BSL-2), pričom ochrana personálu využíva prax úrovne biologickej bezpečnosti 3 (BSL-3).Podľa týchto požiadaviek bola od začiatku januára do začiatku februára 2020 kapacita laboratória CDC v Číne Wuhan schopná odhaliť len niekoľko stoviek prípadov denne.Za normálnych okolností by to pri testovaní iných infekčných chorôb nebol problém.Avšak pri riešení globálnej pandémie, akou je COVID-19 s potenciálne miliónmi ľudí, ktorí majú byť testovaní, sa RT-PCR stáva kritickým problémom z dôvodu požiadaviek na špeciálne laboratórne zariadenia alebo technické vybavenie.Tieto nevýhody môžu obmedzovať použitie RT-PCR ako účinného nástroja na skríning a môžu tiež viesť k oneskoreniu správ o výsledkoch testovania.
Sérologická metóda detekcie protilátok
S progresiou priebehu ochorenia, najmä v stredných a neskorých štádiách, je miera detekcie protilátok veľmi vysoká.Štúdia vo Wuhan Central South Hospital ukázala, že miera detekcie protilátok by mohla dosiahnuť viac ako 90 % v treťom týždni infekcie COVID-19.Protilátka je tiež produktom ľudskej imunitnej odpovede proti novému koronavírusu.Protilátkový test ponúka oproti RT-PCR niekoľko výhod.Po prvé, sérologické testy protilátok sú jednoduché a rýchle.Testy laterálneho prietoku protilátok možno použiť na mieste starostlivosti, aby sa výsledok dosiahol do 15 minút.Po druhé, cieľom detekovaným sérologickým testom je protilátka, o ktorej je známe, že je oveľa stabilnejšia ako vírusová RNA.Počas odberu, prepravy, skladovania a testovania sú vzorky na testy protilátok vo všeobecnosti stabilnejšie ako vzorky na RT-PCR.Po tretie, pretože protilátka je rovnomerne distribuovaná v krvnom obehu, v porovnaní s testom nukleových kyselín je menšia odchýlka pri odbere vzoriek.Objem vzorky potrebný na test protilátky je relatívne malý.Napríklad 10 mikrolitrov krvi z pichnutia do prsta stačí na použitie v teste laterálneho prietoku protilátky.
Vo všeobecnosti sa protilátkový test vyberá ako doplnkový nástroj na detekciu nukleových kyselín na zlepšenie miery detekcie nového koronavírusu počas priebehov ochorenia.Keď sa test na protilátky používa spolu s testom na nukleovú kyselinu, môže to zvýšiť presnosť testu na diagnostiku COVID19 znížením potenciálnych falošne pozitívnych a falošne negatívnych výsledkov.Aktuálna prevádzková príručka neodporúča používať dva typy testov oddelene ako nezávislý formát detekcie, ale mala by sa používať ako kombinovaný formát.[2]
Obrázok 2:Správna interpretácia výsledkov testov nukleových kyselín a protilátok na detekciu novej infekcie koronavírusom
Obrázok 3:Liming Bio-Products Co., Ltd. – Súprava na duálny rýchly test protilátok proti koronavírusu IgM/IgG (StrongStep®Rýchly test protilátok IgM/IgG na SARS-CoV-2, latexová imunochromatografia)
Obrázok 4:Liming Bio-Products Co., Ltd. – StrongStep®Nový koronavírus (SARS-CoV-2) Multiplex Real-Time PCR kit (detekcia troch génov, metóda fluorescenčnej sondy).
Poznámka:Táto vysoko citlivá súprava PCR pripravená na použitie je k dispozícii v lyofilizovanom formáte (proces sušenia mrazom) na dlhodobé skladovanie.Súpravu možno prepravovať a skladovať pri izbovej teplote a je stabilná jeden rok.Každá skúmavka s premixom obsahuje všetky činidlá potrebné na amplifikáciu PCR, vrátane reverznej transkriptázy, polymerázy Taq, primerov, sond a substrátov dNTPs. na prístroj PCR na spustenie amplifikácie.
V reakcii na prepuknutie nového koronavírusu spoločnosť Liming Bio-Products Co., Ltd. rýchlo pracovala na vývoji dvoch diagnostických súprav, ktoré umožnia klinickým laboratóriám a laboratóriám verejného zdravia rýchlo diagnostikovať infekciu COVID-19.Tieto súpravy sú veľmi vhodné na použitie na rozsiahly skríning v krajinách a regiónoch, kde sa rýchlo šíri nový koronavírus, a na poskytovanie diagnostiky a potvrdenia infekcie COVID-19.Tieto súpravy sú určené na použitie len v rámci vopred oznámeného povolenia na núdzové použitie (PEUA).Testovanie je obmedzené na laboratóriá certifikované podľa predpisov národných alebo miestnych úradov.
Metóda detekcie antigénu
1. Detekcia vírusového antigénu je klasifikovaná v rovnakej kategórii priamej detekcie ako detekcia nukleových kyselín.Tieto metódy priamej detekcie hľadajú dôkazy o vírusových patogénoch vo vzorke a môžu sa použiť na potvrdenie diagnózy.Vývoj súprav na detekciu antigénov však vyžaduje vysokú kvalitu monoklonálnych protilátok so silnou afinitou a vysokou citlivosťou, ktoré sú schopné rozpoznať a zachytiť patogénne vírusy.Výber a optimalizácia monoklonálnej protilátky vhodnej na použitie pri príprave súpravy na detekciu antigénu zvyčajne trvá viac ako šesť mesiacov.
2. V súčasnosti sú činidlá na priamu detekciu nového koronavírusu stále v štádiu výskumu a vývoja.Preto žiadna súprava na detekciu antigénu nebola klinicky overená a komerčne dostupná.Hoci sa už predtým uvádzalo, že diagnostická firma v Shenzhene vyvinula súpravu na detekciu antigénu a bola klinicky testovaná v Španielsku, spoľahlivosť a presnosť testu nebolo možné overiť kvôli problémom s kvalitou činidla.K dnešnému dňu NMPA (bývalý čínsky FDA) zatiaľ neschválil žiadnu súpravu na detekciu antigénu na klinické použitie.Na záver možno povedať, že boli vyvinuté rôzne metódy detekcie.Každá metóda má svoje výhody a obmedzenia.Výsledky rôznych metód možno použiť na overenie a doplnenie.
3. Výroba kvalitnej testovacej súpravy na COVID-19 silne závisí od optimalizácie počas výskumu a vývoja.Liming Bio-Product Co., Ltd.testovacie súpravy musia spĺňať prísne výrobné normy a normy kontroly kvality, aby sa zabezpečilo, že budú poskytovať najvyššiu úroveň výkonu a konzistencie.Vedci zo spoločnosti Liming Bio-Product Co., Ltd. majú viac ako dvadsaťročné skúsenosti s navrhovaním, testovaním a optimalizáciou diagnostických súprav in vitro, aby zabezpečili najvyššiu úroveň výkonu pri analytickej kvantifikácii.
Počas pandémie COVID-19 čínska vláda čelila nárastu obrovského dopytu po materiáloch na prevenciu epidémií v medzinárodných hotspotoch.5. apríla na tlačovej konferencii Spoločného preventívneho a kontrolného mechanizmu Štátnej rady „Posilnenie riadenia kvality zdravotníckych materiálov a regulácia poriadku na trhu“ Ťiang Fan, inšpektor prvého stupňa odboru zahraničného obchodu ministerstva of Commerce, povedal: „Ďalej zameriame naše úsilie na dva aspekty, po prvé, na urýchlenie podpory väčšieho množstva zdravotníckych potrieb, ktoré potrebuje medzinárodné spoločenstvo, a tiež na zlepšenie kontroly kvality, regulácie a riadenia produktov. Čína prispeje k spoločnej reakcii na globálnu epidémiu a vybudovaniu komunity so spoločnou budúcnosťou ľudstva.
Obrázok 5:Nové činidlo na koronavírus od Liming Bio-Products Co., Ltd získalo registračný certifikát EÚ CE
Čestný certifikát
Houshenshan
Obrázok 6. Liming Bio-Products Co., Ltd. podporila horskú nemocnicu Wuhan Vulcan(HouShenShan) v boji proti epidémii COVID-19 a získala čestný certifikát Červeného kríža Wuhan.Horská nemocnica Wuhan Vulcan je najznámejšou nemocnicou v Číne, ktorá sa špecializuje na liečbu ťažkých pacientov s COVID - 19.
Ako sa nový koronavírus šíri po celom svete, spoločnosť Nanjing Liming Bio-Products Co., Ltd. zintenzívňuje podporu a pomoc komunitám na celom svete s našimi inovatívnymi technológiami v boji proti tejto bezprecedentnej globálnej hrozbe.Rýchle testovanie infekcie COVID-19 je kritickou súčasťou riešenia tejto hrozby.Naďalej prispievame významným spôsobom poskytovaním vysokokvalitných diagnostických platforiem do rúk zdravotníckych pracovníkov v prvej línii, aby ľudia mohli získať kritické výsledky testovania, ktoré potrebujú.Úsilím spoločnosti Liming Bio-products Co., Ltd. v boji proti pandémii COVID-19 je prispieť našimi technológiami, skúsenosťami a odbornými znalosťami do medzinárodných komunít na vybudovanie globálnej komunity osudu.
Dlho stlačte ~ Skenujte a sledujte nás
Email: sales@limingbio.com
Webstránka: https://limingbio.com
Čas odoslania: máj-01-2020
