Ktorá metóda je najlepšia?
— Testy na diagnostiku infekcie SARS-CoV-2
V prípade potvrdených prípadov COVID-19 hlásené bežné klinické príznaky zahŕňajú horúčku, kašeľ, myalgiu alebo únavu.Tieto symptómy však nie sú jedinečnými znakmi COVID-19, pretože tieto symptómy sú podobné príznakom iných vírusom infikovaných chorôb, ako je chrípka.V súčasnosti sú primárnymi nástrojmi klinickej diagnostiky infekcie vírusová nukleová kyselina v reálnom čase PCR (rt-PCR), CT zobrazenie a niektoré hematologické parametre.Čínske CDC vyvinulo a používa mnoho laboratórnych testovacích súprav na testovanie vzoriek pacientov na COVID-191, US CDC2a iné súkromné spoločnosti.Test na protilátky IgG/IgM, sérologická testovacia metóda, bol tiež pridaný ako diagnostické kritérium do aktualizovanej verzie čínskych smerníc pre diagnostiku a liečbu nového koronavírusového ochorenia (COVID-19), ktorá bola vydaná 3.1.Test vírusovej nukleovej kyseliny rt-PCR je stále aktuálnou štandardnou diagnostickou metódou na diagnostiku COVID-19.
StrongStep®Nový Coronavlrus (SARS-COV-2)Multiplex Real-Time PCR Kit (detekcia troch génov)
Napriek tomu tieto testovacie súpravy PCR v reálnom čase, ktoré hľadajú genetický materiál vírusu, napríklad vo výteroch z nosa, úst alebo konečníka, trpia mnohými obmedzeniami:
1) Tieto testy majú dlhé časy obrátky a sú komplikované v prevádzke;generovanie výsledkov zvyčajne trvá v priemere 2 až 3 hodiny.
2) Testy PCR vyžadujú certifikované laboratóriá, drahé vybavenie a vyškolených technikov.
3) Existuje niekoľko falošne negatívnych výsledkov rt-PCR COVID-19.Môže to byť spôsobené nízkou vírusovou záťažou SARS-CoV-2 vo vzorke výteru z horných dýchacích ciest (nový koronavírus infikuje najmä dolné dýchacie cesty, ako sú pľúcne alveoly) a test nedokáže identifikovať ľudí, ktorí prešli infekciou, vyliečili sa a vyčistili vírus z ich tiel.
Výskum Lironga Zoua a kol4zistili, že vyššia vírusová záťaž bola zistená krátko po nástupe symptómov, pričom vyššia vírusová záťaž bola zistená v nose ako v hrdle a vzor vylučovania vírusovej nukleovej kyseliny u pacientov infikovaných SARS-CoV-2 sa podobá vzoru u pacientov s chrípkou4a zdá sa odlišný od toho, ktorý bol pozorovaný u pacientov infikovaných SARS-CoV-2.
Yang Pan a kol5skúmali sériové vzorky (výtery z hrdla, spútum, moč a stolicu) od dvoch pacientov v Pekingu a zistili, že vírusová záťaž vo vzorkách výteru z hrdla a spúta vyvrcholila približne 5 až 6 dní po nástupe symptómov, vzorky spúta vo všeobecnosti vykazovali vyššiu vírusovú záťaž ako vzorky výterov z hrdla.Vo vzorkách moču alebo stolice od týchto dvoch pacientov sa nezistila žiadna vírusová RNA.
Test PCR poskytuje pozitívny výsledok iba vtedy, keď je vírus stále prítomný.Testy nedokážu identifikovať ľudí, ktorí prešli infekciou, vyliečili sa a odstránili vírus zo svojho tela.V skutočnosti len asi 30 % - 50 % bolo pozitívnych na PCR u pacientov s klinicky diagnostikovanou pneumóniou s novým koronavírusom.Mnoho pacientov s novým koronavírusovým zápalom pľúc nemôže byť diagnostikovaných kvôli negatívnemu testu nukleových kyselín, takže nemôžu dostať zodpovedajúcu liečbu včas.Od prvého do šiesteho vydania usmernení, spoliehajúcich sa výlučne na diagnostiku výsledkov testov nukleových kyselín, čo spôsobilo klinickým lekárom veľké problémy. Najstarší „whistleblower“, Dr. Li Wenliang, oftalmológ z Wuhan Central Nemocnica je mŕtva.Počas života mal tri testy nukleových kyselín v prípade horúčky a kašľa a naposledy mal pozitívne výsledky PCR.
Po diskusii odborníkov sa rozhodlo o zvýšení metód testovania séra ako nového diagnostického kritéria.Zatiaľ čo testy protilátok, nazývané aj sérologické testy, dokážu potvrdiť, či bol niekto infikovaný aj po tom, čo sa jeho imunitný systém zbavil vírusu, ktorý spôsobuje COVID-19.
Rýchly test protilátok StrongStep® SARS-COV-2 IgG/IgM
Test na protilátky IgG/IgM pomôže oveľa viac vysledovať, kto mal infekciu na základe populácie, pretože sa zdá, že mnohé prípady sa šíria od asymptomatických pacientov, ktorých nemožno ľahko identifikovať.Manželský pár v Singapure, manžel bol pozitívne testovaný pomocou PCR, výsledok testu PCR jeho manželky bol negatívny, ale výsledky testu na protilátky ukázali, že má protilátky, rovnako ako jej manžel.
Sérologické testy musia byť starostlivo overené, aby sa zaistilo, že reagujú spoľahlivo, ale iba na protilátky proti novému vírusu.Jednou z obáv bolo, že podobnosť medzi vírusmi, ktoré spôsobujú závažný akútny respiračný syndróm, a COVID-19 by mohla viesť ku skríženej reaktivite.IgG-IgM vyvinutý Xue Feng wangom6sa považovalo za možné použiť ako test na mieste starostlivosti (POCT), keďže ho možno vykonať v blízkosti lôžka s krvou z prsta.Súprava má senzitivitu 88,66 % a špecificitu 90,63 %.Stále však existovali falošne pozitívne a falošne negatívne výsledky.
V aktualizovanej verzii čínskeho usmernenia na diagnostiku a liečbu nového koronavírusového ochorenia (COVID-19)1potvrdené prípady sú definované ako podozrivé prípady, ktoré spĺňajú jedno z nasledujúcich kritérií:
(1) Vzorky z dýchacieho traktu, vzorky krvi alebo stolice boli pozitívne testované na SARS-CoV-2 nukleovú kyselinu pomocou rt-PCR;
(2) Genetické sekvenovanie vírusu zo vzoriek dýchacích ciest, krvi alebo stolice je vysoko homológne so známym SARS-CoV-2;
(3) Sérové nové protilátky IgM špecifické pre koronavírus a protilátky IgG boli pozitívne;
(4) Nové sérové protilátky IgG špecifické pre koronavírus sa zmenili z negatívnej na pozitívnu alebo protilátky IgG špecifické pre koronavírus počas obdobia zotavenia sú 4-krát vyššie ako počas akútneho obdobia.
Diagnostika a liečba COVID-19
| Smernice | Publikované | Potvrdené diagnostické kritériá |
| Verzia 7 | 3. marca 2020 | ❶ PCR ❷ NGS ❸ IgM+IgG |
| Verzia 6 | 18. februára 2020 | ❶ PCR ❷ NGS |
Odkaz
1. Pokyny pre diagnostiku a liečbu novej koronavírusovej pneumónie (skúšobná verzia 7, Národná komisia pre zdravie Čínskej ľudovej republiky, vydaná 3. marca 2020)
http://www.nhc.gov.cn/yzygj/s7652m/202003/a31191442e29474b98bfed5579d5af95.shtml
2. Na identifikáciu 2019-nCoV používajte iba protokol RT-PCR v reálnom čase
https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/lab/rt-pcr-detection-instructions.html
3. Singapur požaduje prvé použitie testu na protilátky na sledovanie infekcií koronavírusom
https://www.sciencemag.org/news/2020/02/singapore-claims-first-use-antibody-test-track-coronavirus-infections
4. Vírusová záťaž SARS-CoV-2 vo vzorkách horných dýchacích ciest infikovaných pacientov 19. februára 2020 DOI: 10.1056/NEJMc2001737
5. Vírusové zaťaženie SARS-CoV-2 v klinických vzorkách Lancet Infect Dis 2020 Publikované online 24. februára 2020 (https://doi.org/10.1016/S1473-3099(20)30113-4)
6. Vývoj a klinická aplikácia rýchleho testu kombinovanej protilátky IgM-IgG na SARS-CoV-2
Diagnóza infekcie XueFeng Wang ORCID iD: 0000-0001-8854-275X
Čas odoslania: 17. marca 2020
